Каталог

Кроссоверы в хроматографии

По мнению компании Interchim к этому классу можно отнести три модели, появившиеся в 2012 году в гамме приборов, выпускаемых Interchim. Это уже описанная выше модель puriFlash 4100-250 и две схожих по параметрам модели Premium класса pF 4250-050 и pF 4250-250. Из названия моделей понятно, что это хроматографы с четверным градиентом и максимальным рабочим давлением 250 бар. puriFlash 4100-250 Обе модели серии 4250 во многом схожи с 4100 хроматографом: та же камера предварительного смешения растворителей с изменяемым объемом; от pF 450 к этим моделям перешли большой и малый держатели колонок, оба прибора в базе оснащаются 6-портовым программно-управляемым краном-переключателем с возможностью петлевого ввода. Обе модели предназначены для работы как со стандартными флэш-картриджами, так и с препаративными ВЭЖХ колонками с размером частиц сорбента до 5 микрон. Отличие, по сути, одно: модель 4250-050 оснащена насосом с максимальным расходом элюента до 50 мл/мин и рассматривается производителем как прибор, предназначенный в первую очередь для отработки методик и очистки сравнительно небольших количеств вещества на 15-микронных флэш-картриджах размером до 800 г (или для работы с 5-микронными ВЭЖХ колонками диаметром до 30 мм). «Старший» на сегодняшний день кроссовер 4250-250 — абсолютно уникальная модель с широчайшими возможностями работы с флэш-картриджами любого объема и препаративными 5-мкм ВЭЖХ колонками диаметром до 80 мм! Ниже мы приводим два примера хроматограмм из библиотеки компании MACHEREY-NAGEL: Компоненты: 4-ацетамидофенол; 2-ацетамидофенол; ацетилсалициловая кислота
NUCLEODUR® C18 HTec — High Loadability of a Preparative Column under Acidic
Conditions (pH 3.0)
Method: HPLC
Application-No.: 123890
Substances: 4-acetamidophenol; 2-acetamidophenol; acetylsalicylic acid
Column: A: VP 100/21 NUCLEODUR® C18 HTec, 5 µm
B: AXIATM 100 x 21.2 mm Gemini® 110 Å 5 µm C18
Phase: A: NUCLEODUR® C18 HTec
B: competitor phase
REF number: 762553.210
Sample pretreatment: Sample is dissolved in DMSO (400 mg/mL)!
Conditions: Eluent: acetonitrile / formic acid in water, pH 3.0 (30:70, v/v)
Flow rate: 28 mL/min
Temperature: 22°C
Pressure: 104 - 124 bar
Detection: UV, 254 nm
Author(-s): HPLC department
Source: MACHEREY-NAGEL, Germany 2010
Keywords: column loadability; preparative HPLC
Chromatogram:
Legend: Phases:
A: NUCLEODUR® C18 HTec, 5 µm
B: Gemini® 110 Å 5 µm C18

Peaks
1 - 4-acetamidophenol
2 - 2-acetamidophenol
3 - acetylsalicylic acid
Разделение гексобарбитала и тиамилала
NUCLEODUR® C18 HTec — High Loadability of a Preparative Column under Basic Conditions (pH 7.7)
Method: HPLC
Application-No.: 123900
Substances: hexobarbital, thiamylal
Column: A: VP 100/21 NUCLEODUR® C18 HTec, 5 µm
B: AXIATM 100 x 21.2 mm Gemini® 110 Å 5 µm C18
Phase: A: NUCLEODUR® C18 HTec
B: competitor phase
REF number: 762553.210
Sample pretreatment: Sample is dissolved in DMSO (400 mg/mL)!
Conditions: Eluent: methanol / 25 mM NH4HCO3, pH 7.7 (60:40, v/v)
Flow rate: 28 mL/min
Temperature: 22°C
Pressure: 140 - 161 bar
Detection: UV, 254 nm
Author(-s): HPLC department
Source: MACHEREY-NAGEL, Germany 2010
Chromatogram:
Legend: Phases:
A: NUCLEODUR® C18 HTec, 5 µm
B: Gemini® 110 Å 5 µm C18

Peaks
1 - hexobarbital
2 - thiamylal
В этих примерах для нас наибольший интерес представляют условия, при которых проводилось хроматографирование продуктов: скорость потока (в первом и во втором примере) — 28 мл/мин; давление: 104-124 бара в первом примере и 140-161 бар во втором примере. Эти значения показывают, с каким большим запасом и по скорости потока, и по давлению эти же работы могут быть выполнены на хроматографе pF 4250-250 (напомним: максимальная скорость потока элюента 250 мл/мин, максимальное рабочее давление 250 бар) с использованием тех же самых оригинальных колонок VP 100/21 NUCLEODUR® C18 HTec, 5 µm компании MACHEREY-NAGEL. Кроссоверы в хроматографииТаким образом, 4000 серия хроматографов действительно представляет собой уникальную линейку приборов, одинаково приспособленных как для классической флэш-хроматографии, так и для классической препаративной ВЭЖХ и пришедший совсем из других областей термин «кроссовер» абсолютно оправдано применяется компанией Interchim ко всему 4000 ряду приборов. Выше уже говорилось о том, что все хроматографы puriFlash представляют собой модульную конструкцию, состоящую из нескольких отдельных блоков. Все модели, выпускаемые компанией Interchim SA, производятся во Франции и управляются электроникой концерна Hitachi, выпускаемой на заводах Hitachi в Японии. «Сердцем» любой модели является высокопроизводительный классический двухплунжерный насос, обеспечивающий прецизионную подачу растворителей с точностью градиента в пределах ± 1 %. Все насосы изготовлены из специальной нержавеющей стали и обеспечивают долговремен-ную работу узла с любыми растворителями и буферными растворами. Различные модели снабжаются разными насосами, имеющими производительность 50, 150, 200, 250 и 800 мл/мин. Максимальное давление, с которым могут работать разные модели насосов, варьируется от 50 до 250 бар (см. Табл. 1 и 2) Все хроматографы в базовой комплектации оснащаются UV-VIS детектором с диодной матрицей (за исключением модели pF 210), позволяющим проводить измерения в UV-Vis диапазоне длин волн от 200 до 600 нм. При желании этот диапазон может быть расширен до 190 – 840 нм. Применение диодной матрицы позволяет реализовывать несколько режимов детекции: произвольно выбранная длина волны и одновременное отслеживание всего спектрального диапазона или детекция сигнала на двух произвольно выбранных длинах волн. Для работы в изократическом режиме предназначен рефрактометрический детектор IOTA-2 французской компании Precision Instruments, специализирующейся на производстве детекторов для ВЭЖХ.
Чувствительнось: от 1/16.10-5 RIU до 64.10-5 RIU
Шумы: 10-8 RIU (аналитика); 3.10-6 RIU (препаратив)
Дрейф: < 5.10-7 RIU (аналитика); 5.10-8 (препаратив)
Линейность: 5.10-3 RIU (аналитика); 5.10-2 RIU (преп)
Особый интерес представляет комбинация UV-Vis детектора и испарительного детектора светорассеяния (ELSD-детектора). ELSD-детекторы уже достаточно широко применяются в аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии, но до сих пор использование их в препаративных целях ограничивается тем, что максимальная скорость потока элюента, с которой могут работать ELSD-детекторы ограничена 4–5 мл/мин, что исключает их прямое применение в препаративных системах. Компания Interchim в сотрудничестве с французским производителем ELSD-детекторов SEDERE модифицировали стандартный анализатор таким образом, что сохраняя возможность работы с аналитическими системами, ELSD-детектор, поставляемый компанией Interchim, способен работать до скорости потока в препаративной системе, достигающей 160 мл/мин, что является рекордным на сегодняшний день показателем. Принцип работы ELSD-детектора основан на том, что раствор исследуемой смеси, пройдя через хроматографическую колонку распыляется и смешивается с инертным газом (обычно — азотом) или воздухом и образует жидко-капельную дисперсию. Этот аэрозольный поток проходит через нагретую трубку, в которой происходит испарение подвижной фазы. Образующаяся дисперсия частиц анализируемого вещества проходит через лазерный луч, приводя к рассеянию потока фотонов. Изменение параметров лазерного луча обрабатывается и выводится на экран в виде обычной хроматограммы. Принцип работы ELSD-детектора Принцип работы ELSD-детектора Принцип работы ELSD-детектора ELSD-детекторы обнаруживают любое соединение при условии, что температура перехода в газообразное состояние этого вещества должна быть больше, чем у подвижной фазы, при этом обеспечивается действительно универсальное определение в изократических или градиентных условиях независимо от поглощения, флуоресценции или электроактивности исследуемых веществ. В сравнении со спектрофотометрическим детектором, ELSD-устройства позволяют определять вещества не поглощающие в УФ-области (полимеры, аминокислоты, углеводы, липиды, стероиды, терпены и т.д.).
В сравнении со спектрофотометрическим детекто-ром, ELSD позволяет определять вещества, не поглощающие в УФ-области (полимеры, амино-кислоты, углеводы, липиды, стероиды, терпены и т.д.)
1. Адипиновая кислота
2. Кофеин
3. Никотиновая кислота
4. Никотинамид
5. 2-Амино-1-бутанол
УФ 220 нм
При всех положительных качествах устройства надо отметить его более высокую по сравнению с традиционными UV-Vis детекторами стоимость, а также ту особенность, что ELSD-детектор является датчиком разрушающего типа, то есть часть вещества, проходящего через ELSD, теряется безвозвратно. Последнее, впрочем, компенсируется тем, что при препаративном использовании через ELSD-детектор проходит несоизмеримо малая по сравнению с основным потоком часть вещества. После прохождения анализируемого образца через колонку и детектор разделенные фракции собираются в коллекторе фракций, который стандартно поставляется с 4 рэками из нержавеющей стали. Каждый штатив (в стандартной комплектации) рассчитан на 44 пробирки высотой до 180 мм и диаметром до 18 мм, но существуют рэки и под другие размеры пробирок (например, для пробирок 13×100 мм, 16×150 мм, 18×150 мм, 21×150 мм, 25×150 мм, 28×150 мм, 29,5×200 мм или для бутылок емкостью 250 мл), так что при полной загрузке всех четырех штативов пробирками 18×180 мм общий объем коллектора фракций составляет 5 632 мл.
Размер сосуда Количество сосудов Объём сосуда (мл) Полный объём (мл)
13×100 мм 240 9 2160
16×150 мм 176 22 3872
18×150 мм 176 25 4400
18×180 мм 176 32 5632
21×150 мм 108 35 3780
25×150 мм 64 60 3840
28×150 мм 56 75 4200
29.5×200 мм 56 110 6160
250 мл 3x2 250 1500
500 мл 3x2 500 3000
Если вы работаете с колонками большого объема и с высокими скоростями потока элюента, то вместо пробирочных штативов можно использовать вороночные штативы, при этом различные фракции собираются в ваши собственные емкости, соединенные шлангами с воронками рэка.
Коллектор фракций с пробирочными рэками Вороночный штатив
Коллектор фракций с пробирочными рэками Вороночный штатив
В тех случаях, когда ни один из выпускаемых штативов для коллектора фракций вас не устраивает, вы можете создать свой собственный вариант, используя емкости любого типа (банки, бутылки, чашки Петри, планшеты и т.п.), задав координаты центра горла емкости по осям X и Y, и указав количество используемых вами виал (банок, бутылок и т.п.). Следует обратить внимание, что любая из описанных выше моделей хроматографов, хотя и является модульной конструкцией, но самостоятельная работа любого из блоков невозможна, т.е. вы не можете использовать, например, никакой из насосов серии puriFlash как самостоятельный модуль. Это не всегда удобно, особенно в тех случаях, когда в лаборатории уже имеется что-то из оборудования, необходимого для хроматографии: коллектор фракций, детектор, и т.д. Именно для таких случаев компания Interchim разработала серию One, во всем аналогичную традиционным моделям, но в этой серии каждый из блоков (насос, детектор, коллектор фракций) являются абсолютно независимыми приборами, которые могут работать практически с любым оборудованием других производителей. Interchim разработала серию One Каждый из блоков этой серии имеет собственный сенсорный дисплей, а в программное обеспечение каждого модуля уже заложены управляющие коды для многих моделей хроматографического оборудования других производителей (Gilson, Knauer и т.п.). И, конечно, собранные вместе, все три модуля (насос, детектор и коллектор фракций) прекрасно «понимают» друг друга и составляют мощный, компактный препаративный хроматограф для любых задач. « В раздел «Препаративная хроматография»



« Перейти в каталог